Investigadores de la RICET del grupo del Hospital Vall d'Hebron y del Centro de Investigación de Enfermedades Tropicales, Universidad de Salamanca (CIETUS), han evaluado con éxito el uso del LAMP para el diagnóstico de la esquistosomiasis urogenital en una zona rural de Angola, dónde la enfermedad es endémica.
El estudio colaborativo, Field and laboratory comparative evaluation of a LAMP assay for diagnosis of urogenital schistosomiasis in Cubal, Central Angola, publicado en Tropical Madicine and International Health, recogió un total de 172 muestras de orina de pacientes de edad escolar para la detección de esquistosomiasis urogenital mediante la valoración de microhematuria, examen microscópico para la detección de huevos de S. haematobium y detección molecular mediante Sh-LAMP. Las muestras obtenidas sufrieron un almacenaje inadecuado, con constantes congelaciones y descongelaciones debido a cortes eléctricos constantes. El Sh-LAMP para la detección de ADN de S. haematobium se llevó a cabo tanto con extracción como sin extracción previa de ADN en las muestras de orina y los resultados se leyeron visualmente mediante la detección de turbidez de la mezcla de reacción y mediante cambio colorimétrico utilizando SYBR Green I (verde positivo; naranja negativo), a pesar de que las muestras obtenidas sufrieron problemas de almacenaje, debido a los constantes cortes de energía eléctrica. En un total de 83/172 (48.30%) se observó microhematuria, en 87/172 (50.60%) se detectaron huevos de S. haematobium mediante microscopía y 127/172 (73.83%) resultaron positivas en la detección de ADN de S. haematobium mediante Sh-LAMP. Además, la relación de los resultados entre Sh-LAMP y microscopía, y Sh-LAMP y microhematuria fue estadísticamente significativa (p=0.0002 y p=0.0009, respectivamente). Cuando las muestras de ADN purificado se reanalizaron en España, en el laboratorio de referencia del CIETUS, empleando la misma metodología que en el campo, la reproducibilidad general alcanzó un 72.10%.
La sencillez, versatilidad y la buena relación coste-efectividad demostrada por el Sh-LAMP cuando se aplicó en campo junto con la consistente reproducibilidad en un laboratorio de referencia, sugiere que esta técnica podría utilizarse como método de diagnóstico molecular para la esquistosomiasis urogenital en zonas endémicas remotas y de bajos recursos.
El Lamp
La amplificación isotérmica de ácidos nucleicos mediada por bucles o LAMP está basado en el principio de síntesis de ácidos nucleicos a temperatura constante (60ºC-65ºC), llevado a cabo por una polimerasa con alta actividad de desplazamiento de cadena, siendo la Bst polimerasa (obtenida de la bacteria Bacillus stearothermophillus) la más utilizada. Una de las grandes ventajas de este método es su alto rendimiento, generando una gran cantidad de material genético partiendo de muy pocas copias de ADN.
En la actualidad se considera que la técnica LAMP tiene un elevado potencial para su aplicación como Point of Care Test (POCT) en áreas endémicas de Neglected Tropical Diseases (NTDs) por su facilidad de uso e interpretación de los resultados. Aunque todavía se requiere trabajar mucho para acercar al LAMP a los criterios establecidos por la OMS. Para lograrlo, se están desarrollando diversas estrategias encaminadas a resolver los inconvenientes que se presentan para mantener la cadena de frío, evitar la extracción de ADN o desarrollar nuevos dispositivos tecnológicos que faciliten su aplicación práctica en el campo.
Un Smart-Lamp
El grupo de la RICET del CIETUS está desarrollando un sistema integrado de amplificación y detección de ADN mediante identificación colorimétrica, gestionado a través de un dispositivo móvil tipo smartphone. Es una plataforma de pequeño tamaño, portátil, independiente de la electricidad, con sistemas de geolocalización y transmisión de resultados, siendo por tanto muy útil para el diagnóstico de enfermedades tropicales en áreas endémicas, a veces de difícil acceso.
Frente a los métodos convencionales, el Smart-Lamp realiza un diagnóstico molecular específico y con alta sensibilidad utilizando una plataforma portátil, de pequeño tamaño, autónoma, de fácil manejo y gestión de datos en tiempo real a través del teléfono móvil. Este Smart-Lamp, podría tener un alto impacto socioeconómico ya que el objetivo final es mejorar la salud de los ciudadanos mediante el avance en el diagnóstico y control de estas patologías.
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